近日，我司联合浙江省疾病预防控制中心微生物所，在国际知名期刊《ACS Pharmacology & Translational Science》上发表重要研究成果。研究团队成功开发出基于重组绿色荧光蛋白的病毒蛋白酶抑制剂筛选平台DIFF-rGFP，这一创新体系大幅提升了抗病毒药物筛选的速度与准确性，标志着相关技术迈入新纪元。
文章重点阐述了DIFF-rGFP的构建原理与应用优势。相较于传统筛选方法，DIFF-rGFP在安全性、灵敏度、广谱性及细胞相关性方面实现了提升，为病毒蛋白酶抑制剂的发现提供了一种更安全、更高效、适用于多病毒家族的创新筛选平台。
技术突破亮点
传统病毒蛋白酶抑制剂筛选方法长期面临两大难题：非细胞水平筛选缺乏体内相关性，而活病毒筛选则存在生物安全风险高、通量低等局限。迪福润丝研发团队通过对绿色荧光蛋白（GFP）结构的深入探索，成功鉴定了三个高度柔性区域（E116~L120、M154~N160、H170~V177），这些区域能够容纳外源蛋白酶切割序列而不影响荧光表达，为广谱抑制剂筛选奠定了坚实基础。
图1. 柔性区域测试。（A）将多种切割序列插入三个区域中的代表性位点。（B）可用位点和柔性区域在GFP三维结构中的相应位置。
DIFF-rGFP系统采用P2A自切割序列智能连接重组GFP与蛋白酶基因，确保两者在细胞内的协同表达，显著提升检测灵敏度。以SARS-CoV-2 3CL蛋白酶为模型的验证实验中，使用已知抑制剂GC376和Ensitrelvir进行测试，结果显示该系统与传统活病毒检测法灵敏度仅相差一个数量级，展现出优异的可靠性。
图2. 活病毒检测与rGFP15-3CLpro检测的半数有效浓度对比
应用前景广阔
目前，DIFF-rGFP技术平台已成功应用于多种病毒蛋白酶抑制剂的筛选工作，可在细胞水平直接模拟病毒自然感染过程，有效杜绝漏筛和假阳性问题。这一创新技术不仅为病毒蛋白酶抑制剂筛选提供了强大工具，更为整个抗病毒药物研发行业建立了新的技术标准。
携手共创未来
作为专注于生物医药技术服务的创新企业，迪福润丝生物将持续优化DIFF-rGFP平台，拓展其在更多病毒靶点中的应用。我们诚邀全球药企和科研机构携手合作，共同推动抗病毒药物研发进程，为全球公共卫生安全贡献力量！
文章信息：该研究成果已于2025年10月9日正式发表于《ACS Pharmacology & Translational Science》，欢迎引用原文：https://doi.org/10.1021/acsptsci.5c00262
参考文献：